O método da co-oxidação empregando o sistema β-caroteno/ácido linoleico é um teste simples e sensível, e por não utilizar altas temperaturas permite a determinação da AA de substâncias termossensíveis, porém apresenta alguns inconvenientes. Decker, E. A.; Warner, K.; Mark, P. R.; Shahid, F.; 18. Una de las estrategias más aplicadas en las medidas in vitro de la capacidad antioxidante total de un compuesto, mezcla o alimento, consiste en determinar la actividad del antioxi-dante frente a sustancias cromógenas de naturaleza radical; Food Chem. Mtodos Para eterminação da Atividade Antioxidante de Frutos 2 Desenvolvimento 2.1 Antioxidantes Um antioxidante pode ser definido como uma substância que, em baixas concentrações, retarda ou previne a oxidação do substrato6. 2006, 69, 1228; Marxen, K.; Vanselow, K. H.; Lippemeier, S.; Hintze, R.; Ruser, A.; Hansen, U.; Sensors 2007, 7, 2080; Barreiros, A. L. B. S.; David, J. M.; David, J. P.; Pharm. Brand-Williams, W.; Cuvelier, M. E.; Berset, C.; 21. 34. Food 2009, 12, 77. Dichos métodos se correlacionan entre si ya que se basan en una de las estrategias más aplicadas en la medida in vitro de la capacidad antioxidante total de un compuesto, mezcla o alimento, la cual consiste en determinar la actividad del antioxidante frente a sustancias cromógenas de naturaleza radical, por lo que el cambio de la intensidad del color ocurre de forma proporcional con la concentración de antioxidantes de la muestra (Kuskoski et al. Filho, D. W.; Silva, E. D. Da; Boveris, A. Em. ido realizando adaptaciones del mismo para evaluar diversos alimentos (frutas, zumos, café, verduras). Para uma avaliação correta desta atividade em alimentos e sistemas biológicos, modelos individuais devem ser desenvolvidos desde que representem as mesmas condições químicas, físicas e ambientais esperadas para o sistema em análise. Los antioxidantes son importantes para el organismo por la capacidad que tienen de proteger las macromoléculas biológicas . Miyamoto, S.; Martinez, G. R.; Rettori, D.; Augusto, O.; Medeiros, M. H. G.; Mascio, P. D.; 69. A saturação desta dupla ligação destruirá a conjugação e a coplanaridade da molécula e, consequentemente, sua ação sobre a enzima. Nova 1999, 22, 94. 56. Bioph. Se utilizó Trolox para cuantificar la capacidad antioxidante, y esta se expresó, en ambos métodos, como moles equivalentes de Trolox / g de peso seco. Aliment. Este método é considerado, do ponto de vista metodológico, um dos mais fáceis, precisos e reprodutivos na avaliação da atividade antioxidante de sucos de frutas, extratos vegetais e substâncias puras, tais como flavonoides e terpenoides.19. 28. Food Technol. Este ensaio expressa o resultado em unidade de ORAC ou equivalentes de Trolox, o qual corresponde à quantidade de Trolox em micromols que tem a mesma atividade antioxidante de um litro da solução testada.42. Este método se baseia no poder de redução das amostras sobre Ce+4 e os resultados obtidos apresentaram boa correlação com métodos tradicionais.78 Uma desvantagem do método reside no fato de que Ce (IV) é um forte agente oxidante, de modo que, em amostras mais complexas, se pode perder seletividade, porém por outro lado inúmeras vantagens podem ser citadas, dentre elas, a maior facilidade no pré-tratamento da amostra, a utilização de equipamentos mais baratos e maior simplicidade analítica, além do inerente poder oxidante do Ce4+ (potencial redox de 1,29 V versus Ag/AgCl) que reage praticamente com todos os antioxidantes conhecidos presentes na dieta humana. Varios métodos son utilizados, cada uno basado en diferentes principios y condiciones experimentales, entre los cuales se encuentran el método FRAP (poder antioxidante por reducción del ión férrico), DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidracil) o TEAC (actividad antioxidante en equivalentes Trolox). Tem sido reportado nos últimos 30 anos que o β-caroteno exibe alta reatividade com eletrófilos e oxidantes. Seguindo esta metodologia, Martínez-Tomé et al.57 avaliaram a AA de aminoácidos extraídos de brócolis, no qual a asparagina mostrou mais alta atividade sequestradora do ácido hipocloroso. Brett, A. M. O.; Diculescu, V. C.; Bioelectrochemistry 2004, 64, 143; Zhu, Z.; Li, C.; Li, N. Q.; Microchem. 14. Biochem. Tabela 2- Métodos in vitro para determinar atividade antioxidante. 1995b, 49, 1341. 22. Silva, F. A. M.; Borges, M. F. M.; Ferreira, M. A.; 6. Um dos maiores produtos formados desta degradação é o malondialdeído (MDA), embora outros produtos de oxidação, incluindo aldeídos α, β insaturados e vários precursores não voláteis destas substâncias possam também estar envolvidos.67 Embora este teste seja largamente utilizado, não é específico, e as condições reacionais têm um efeito significativo no desenvolvimento da coloração. Chem. A.; Food Chem. A peroxidação lipídica é a principal causa da deterioração dos corpos graxos. Bae, G. U.; Seo, D. W.; Kwon, H. K.; Lee, H. Y.; Hong, S.; Lee, Z. W.; Ha, K. S.; Lee, H. W.; Han, J. W.; 3. Food Chem. 5. Aruoma, O. I.; Murcia, A.; Butler, J.; Halliwell, B.; J. Agric. Technol. Correlaciones. Keywords: antioxidant activity; oxygen reactive species; radicalar quenching. Cos, P.; Ynig, L.; Calomme, M.; Hu, J. P.; Cimanga, K.; van Poel, B.; Pieters, L.; Vlietinck, A. J.; Vanden Berghe, D.; 55. El ensayo del radical libre DPPH• ha sido extensamente utilizado en la determinación de la CAO de vinos, jugos, frutas y té (Saito et al., 2007; Hartwig et al., 2012; Jayasekera et al., 2011). 54. Kanner, J.; German, J. › de material biológico líquido. 1987, 165, 215. 39. Filho, D. W.; Silva, E. D. Da; Boveris, A. Em Plantas Medicinais sob a Ótica da Moderna Química Medicinal, Ed. Biol. Halliwell, B.; Aeschbach, R.; Loliger, J.; Arouma, O. I.; 14. Esta inhibición es proporcional a la actividad antioxidante del compuesto o la muestra. Barreiros, A. L. B. S.; David, J. P.; de Queiroz, L. P.; David, J. M.; Phytochemistry 2000, 55, 805; David, J. P.; Santos, E. O. Dos; Miranda, M. S.; Barreiros, A. L. B. S.; Santos, I. D. Dos; David, J. M.; Rev. Actividad antioxidante de la ciruela completa, cáscara y pulpa para las dos variedades. fundamentales de la capacidad antioxidante, con énfasis en las moléculas responsables de tal actividad y los métodos disponibles para cuantificarla. 4.1) Métodos analíticos para determinar la capacidad antioxidante ESPECÍFICA en muestras biológicas: Para evitar el daño oxidativo, las células y los organismos aeróbicos requieren generar y mantener defensas antioxidantes de manera óptima e incrementarlas acorde al tamaño de la agresión. Ademais, a aplicação destas técnicas a compostos polifenólicos permite ainda relacionar os valores de n (número de elétrons) ou de I (corrente) aos números de hidroxilas. Entretanto, seu excesso apresenta efeitos deletérios, tais como danos ao DNA, proteínas e organelas celulares, como mitocôndrias e membranas, provocando alterações na estrutura e funções celulares e, dessa forma, se encontram envolvidos em diversas patologias a exemplo de câncer, envelhecimento precoce, doenças cardiovasculares, degenerativas e neurológicas, choque hemorrágico, catarata, disfunções cognitivas, etc.4 Para combater os radicais livres os organismos vivos produzem substâncias que são capazes de regenerar ou prevenir os danos oxidativos, exercendo seu papel como antioxidante. 26. Z.; Raoa, J. M.; Bioorg. Asolini, F. C.; Tedesco, A. M.; Carpes, S. T.; Ferraz, C.; Alencar, S. M. de; J. Brand-Williams, W.; Cuvelier, M. E.; Berset, C.; Lebensm.Wiss. Sánchez-Moreno, C.; Food Sci. 1987, 25, 317. Chevion, S.; Roberts, M. A.; Chevion, M.; Free Radical Biol. 16. 2005, 584, 77; Janeiro, P.; Brett, A. M. O.; Anal. Prod. A.; Saura-Calixto, F.; 22. métodos in vitro son útiles para comparar la activi-dad antioxidante de diferentes muestras de alimentos. O efeito deletério do H2O2 vem de sua fácil conversão para um radical hidroxil, por exposição à luz ultravioleta (Equação 1) ou por interação com metais de transição como o ferro, através da reação conhecida como reação de Fenton (Equação 2).37, Diversas técnicas têm sido aplicadas para diferentes tipos de amostras, a mais comum avalia a capacidade de uma substância sequestrar o peróxido de hidrogênio empregando peroxidase da raiz forte (HRP) que utiliza o H2O2 para oxidar a escopoletina (Figura 4), uma cumarina conhecida por apresentar alta fluorescência, em um produto não fluorescente. Szabo, M. R.; Iditoiu, C.; Chambre, D.; Lupea, A. X.; Reynertson, K. A.; Wallace, A. M.; Adachi, S.; Gil, R. R.; Hui, Y.; Basile, M. J.; D'Armiento, J.; Weinstein, I. Dentre estas, se destacam os métodos baseados na proteção à oxidação de bases de DNA e aqueles baseados na capacidade de redução do Fe3+ e Ce4+. 11. A atividade antioxidante de uma dada substância é determinada através da diferença entre a área da amostra subtraída pela área do branco (Net AUC), medida pelo decaimento da fluorescência com a adição da substância antioxidante no decorrer do tempo. É menos reativo que o OH possuindo um tempo de meia-vida de segundos a nanossegundos.11Oxygen radical absorbance capacity (ORAC) é um método que se baseia na propriedade fluorescente das proteínas B-ficoeritrina (B-PE) e R-ficoeritrina (R-PE). ET Equivalentes Trolox, salvado de arroz estabilizado, plasma . Aliment. Med. Larson, R. A.; Naturally Occcurring Antioxidants, Lewis Publishers: New York, 1997, p. 1. ; Juceni P. DavidII; Marcus V. BahiaIII; Rosane M. AguiarIV, IInstituto de Química, Universidade Federal da Bahia, Campus Ondina, 40170-280 Salvador - BA, Brasil, IIFaculdade de Farmácia, Universidade Federal da Bahia, Campus Ondina, 40170-280 Salvador - BA, Brasil, IIICentro de Formação de Professores, Universidade Federal do Recôncavo da Bahia, 45300-000 Amargosa - BA, Brasil, IVDepartamento de Química e Exatas, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, R. José Moreira Sobrinho, s/n, 45200-000 Jequié - BA, Brasil. Sequestro do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH). Incluye situar la muestra líquida en unas tiras fungibles que contienen un electrodo de trabajo (7), un electrodo de referencia (8) y un electrodo auxiliar (6), aplicar mediante un potenciostato unos rangos de tensiones al electrodo de trabajo según . 1995a, 33, 601. 1998, 46, 1887. Entretanto, a superprodução de O2-" causa estresse oxidativo e está envolvida em diversas patologias.46, Xantina oxidase (XO) é a enzima responsável pela transformação tanto da hipoxantina em xantina, quanto desta em ácido úrico, tendo como consequência a produção de peróxido de hidrogênio e radical superóxido (Figura 7), por isso é considerada uma das principais fontes biológicas de espécies reativas de oxigênio.47 Assim, é possível que a inibição deste processo enzimático por compostos que exibem propriedades antioxidante ou inibitória da xantina oxidase possam ter uso terapêutico.48, A atividade de um grande número de substâncias pode ser medida em termos da atividade sequestradora do radical superóxido ou através da inibição da ação da xantina oxidase. Actualmente la medición de la capacidad antioxidante en productos naturales se ha convertido en una importante herramienta en el control de calidad de alimentos, lo que lleva a la necesidad de validar métodos que permitan medir y comparar la capacidad entre alimentos y productos, además de proveer estándares para 2007, 27, 902. O radical formado pode então reagir com 2-deoxirribose para formar produtos que, sob aquecimento com ácido tiobarbitúrico (ATB) em pH baixo, apresentam coloração rosada, sendo monitorado por espectrofotometria na região do visível (532 nm).58 Substâncias que tenham propriedades antioxidantes podem competir com a 2-deoxirribose pelo radical, produzindo uma diminuição na intensidade da coloração.59 Aruoma et al.60 utilizaram este método para avaliar a atividade antioxidante e pró-oxidante do ácido gálico e seus derivados, concluindo que estas substâncias apresentam ação antioxidante sobre ERO's, porém apresentam efeito pró-oxidante quando em presença de metais de transição como Fe+3. Biotechnol. Por exemplo, α1-AP inibe a enzima elastase. Neste ensaio o radical peroxil, gerado pelar reação do AAPH [dicloreto de 2,2'-azobis(2-amidinopropano)] com oxigênio atmosférico, reage com o indicador fluorescente para formar um produto não fluorescente, que pode ser medido por espectrofotometria com máxima emissão de fluorescência em 575 nm (B-PE) e 578 nm (R-PE).41 Este ensaio avalia a atividade antioxidante através da inibição da oxidação, induzida pelo radical peroxil, por transferência de átomos de hidrogênio. Os radicais livres atuam de maneira deletéria também sobre plantas e alimentos. Um dos métodos usados para a avaliação dos ácidos oxidados baseia-se na insolubilidade dos compostos polares no n-hexano. Um dos fatores determinantes na ação inibitória é a planaridade destas moléculas. Am. Int. 62. Em experimentos in vitro pode ser sequestrado facilmente devido a sua alta reatividade, porém para que esse resultado se reproduza in vivo é necessário que sejam ministradas altas concentrações de antioxidante. (2005), as reações químicas envolvidas nos ensaios de capacidade antioxidante, os ensaios in vitro podem ser divididos em duas categorias: ensaios baseados em reações de transferência de átomos de hidrogênio (HAT - Hydrogen Atom Por exemplo, substâncias polares são mais efetivas em grandes quantidades de óleo porque podem se acumular na interface ar-óleo ou em micelas reversas dentro deste, onde as reações de oxidação lipídica ocorrem com maior frequência devido à alta concentração de oxigênio. O produto da peroxidação lipídica reage com o ATB para formar substâncias que apresentam coloração rosada sob aquecimento, sendo acompanhada por espectrofotometria em 532 nm. 2002, 8, 121. Gomes, A. J.; Lunardi, C. N.; Gonzalez, S.; Tedesco, A. C.; Braz. 1997, 59, 345. 1 Laboratorio de Bioquímica Adaptativa, Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, 61. Food Chem. 2000, 48, 5710. 50. da Silva, J. M. R.; Darmon, N.; Fernandez, Y.; Mitjavilat, S.; J. Agric. 8. 60. Am. 2002, 303, 66. Halliwell12 propõe algumas questões que devem ser usadas para avaliar a ação antioxidante in vivo, que podem ser respondidas por experimentos simples e seu resultado nos permite rejeitar um possível antioxidante, pois um composto que exibe baixa atividade antioxidante in vitro provavelmente exibirá pouca atividade in vivo. , Bahia, Estudio del mercado que permita hacer proyecciones de las ventas. 72. Gutteridge, J. M. C.; Halliwell, B.; 59. Mira el archivo gratuito Evaluacion-de-capacidad-antioxidante-por-el-metodo-orac-utilizando-un-sistema-de-analsis-por-inyeccion-en-flujo enviado al curso de Biologia Categoría: Resumen - 10 - 111300782 3. ABTS Em princípio, os ensaios efetuados em soluções eletrolíticas com maior poder antioxidante requerem maiores potenciais para oxidação das bases de DNA (ex. Int. Com substâncias puras é possível realizar não somente uma caracterização eletroquímica, como também obter correlações entre aspectos estruturais e mecanismo de atividade antioxidante.70 Assim, é possível utilizar técnicas eletroanalíticas para determinar a atividade antioxidante de substâncias de ampla distribuição em vegetais tais como ácidos ascórbico e elágico, resveratrol, flavonoides, hesperidina, taninos, antocianinas e derivados dos ácidos benzoico e cinâmico.71 Alguns aspectos podem ser determinados no que diz respeito aos mecanismos de oxidorredução. Fernández, J.; Pérez-Álvarez, J. , Universidade Federal da Bahia, Instituto de Química , Brazil, , Salvador, J. El objetivo de la tesis fue evaluar la variación capacidad antioxidante en el proceso de elaboración de néctar de copoazú (Theobroma grandiflorum) y néctar de ungurahuí (Oenocarpus bataua): selección, pre cocción, estandarización y néctar; para el cual se ha elaborado néctar con estos dos frutos, y sobre muestras de las etapas del proceso, se ha determinado la capacidad antioxidante y el análisis fítoquímico cualitativo. Procede-se à saponificação da matéria graxa, seguida de uma extração e posterior neutralização dos sabões pelo ácido clorídrico. 57. Brett, A. M. O.; Ghica, M. E.; Electroanalysis 2003, 15, 1745; Roginsky, V.; Barsukova, T.; Hsu, C. F.; Kilmartin, P. A.; J. Agric. 6. Food Chem. Nova 2006, 29, 755. 2005, 43, 351. Kaptanoglu, E.; Solaroglu, I.; Akbiyik, F.; Demirpençe, E.; Ergungor, M. F.; 67. 76. 50 Capacidad antioxidante de subproductos de semillas de amaranto (Amaranthus hypochondriacus).RESUMEN.Se evaluó la capacidad antioxidante (CA) en subproductos de semillas de amaranto (Amaranthus hypo-chondriacus) de dos parcelas de cultivo, en función de tres métodos de extracción y dos disolventes, a tres concentra- A.; 68. Uma das vantagens no uso do homogenato de cérebro de ratos é o emprego de moléculas alvo provenientes de tecido animal na busca por substâncias antioxidantes. Os radicais livres possuem diferentes papéis no organismo e encontram-se envolvidos na produção de energia, fagocitose, regulação do crescimento celular, sinalização intercelular e síntese de substâncias biológicas importantes. Establecer posibles capacidades a instalar. jmdavid@ufba.br 2. Para poder evaluar si la disminución de la capacidad antioxidante es significativa después del proceso de fermentación, se realizó la prueba t de student. Devido à larga divergência dos resultados de testes com antioxidantes naturais em alimentos, muitos protocolos e diretrizes têm sido estabelecidos no sentido de trazer ordem e concordância a este importante campo.10 Para se ter uma avaliação mais precisa da AA de uma determinada substância, é necessário saber quais tipos de radicais são gerados, como, onde e a extensão do dano causado. 2000, 48, 5677. 1989, 18, 297. A reação pode ser monitorada espectrofotometricamente pela perda da coloração do β-caroteno em 470 nm, com leitura imediata e em intervalos de 15 min, por um tempo total de 2 h.27. Food Chem. Wasil et al.69 avaliaram a atividade antioxidante de fluidos humanos extracelulares através da produção de HOCl usando MPO/H2O2/Cl- (Equação 3) como fonte desta substância e concluíram que esta atividade se deve, em grande parte, à albumina presente nestes fluidos. 1991, 51, 794. No entanto, entre as flavonas e flavonóis a presença de grupos hidroxilas nas posições C-5 e C-7 aumenta a ação inibitória, enquanto a presença destes grupos ligados em C-6 e C-3 diminui consideravelmente este efeito. Estes testes têm se tornado ferramentas usuais e extremamente necessárias na . plasma "ferric reducing ability of plasma" (FRAP) e pela capacidade antioxidante do método frente a um padrão . Decker, E. A.; Warner, K.; Mark, P. R.; Shahid, F.; J. Agric. Chem. Food Nutr. Martínez-Tomé, M.; García-Carmona, F.; Murcia, M. A.; 62. A oxidação é inibida com a adição de um antioxidante, sendo acompanhada pela redução na absorvância.66 A formação da coloração é resultado de um complexo formado pelos produtos oxidados dos ácidos graxos insaturados com o ATB. 78. 23. Biochem. Através do uso da eletrólise em fluxo contínuo, observaram-se boas correlações entre intensidade de corrente (I) e atividade antioxidante de diversas espécies eletroativas naturais, tais como catequinas e outros polifenóis. 9. Nova 2009, 32, 2098. Omodeo-Sale, F.; Gramigna, D.; Campaniello, R.; 66. Flavona com um único OH substituinte na posição 5 não apresentou atividade detectável, entretanto flavanona com OH substituinte na posição 6 apresentou atividade maior que a do Trolox. O radical peroxil é um oxidante comumente encontrado em substratos biológicos. Quando os antioxidantes produzidos pelo corpo são insuficientes para combater os radicais livres produzidos pelo organismo, este sofre ações degenerativas através do distúrbio conhecido como estresse oxidativo. Entre eles pode-se destacar: avaliação do efeito de substituintes e conjugação de duplas no deslocamento de potenciais redox; efeito da participação do próton ou dependência do pH;72 efeito de solvente e, número de elétrons ou etapas envolvidas.70,73. La actividad antioxidante de los tres extractos por el método de DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazilo)se realizó, según el método desarrollado por Singh y colaboradores.17Para este ensayo se hizo una curva de calibración con ácido ascórbico para expresar la actividad antioxidante de los extractos como equivalente en mM/L de ácido ascórbico. 33. von Gadew, A.; Joubert, E.; Hansmann, C. F.; J. Agric. 1999, 79, 1301. Food Agric. Estes testes têm se tornado ferramentas usuais e extremamente necessárias na seleção inicial de substâncias que possam ser utilizadas como fármacos, auxiliando os pesquisadores na avaliação da atividade de substâncias isoladas de produtos naturais, bem como obtidas de fontes sintéticas. 1997, 45, 632. Após secagem, a placa é imersa em uma solução contendo o substrato xantina, para iniciar a reação. Según (Cíz y Cízová, 2010) es muy difícil evaluar la actividad antioxidante de un producto sobre la base de un único método que proporcionará información básica sobre las propiedades antioxidantes; una combinación de métodos describe las propiedades antioxidantes de la muestra en más detalle. 2007, 61, 214; Reynertson, K. A.; Wallace, A. M.; Adachi, S.; Gil, R. R.; Hui, Y.; Basile, M. J.; D'Armiento, J.; Weinstein, I. Sin embargo, aún hoy día, los métodos para medir la . Uno de los métodos utilizados para medir para medir la capacidad de captura de radicales hidroxilo es el ensayo de quimioluminiscencia del luminol. Estes testes têm demonstrado a importância de dietas ricas em frutas e vegetais, comprovando a presença de substâncias antioxidantes, as quais auxiliam no combate aos radicais livres. Capacidad antioxidante de mieles venezolanas de los géneros Apis, Melipona y Tetragonisca, evaluada por tres métodos. Métodos: semillas sin piel de P. vulgaris, deshidratadas y maceradas se sometieron a extracción asistida por microondas y extracción sólido-líquido; el contenido de fenoles se evaluó por el método de Folin-Ciocalteu y el potencial antioxidante in vitro se evaluó con base en los métodos del radical estable catión radical difenil-picrilhidrazilo y el radical catión 2,2´-azino-bis . 2004, 67, 958. Embora muitos antioxidantes reajam rapidamente com o radical hidroxil, muitas moléculas biológicas, que são mais abundantes que os antioxidantes, reagem também rapidamente com esse radical. A utilização do meio emulsionado, por exemplo, interfere nos valores de absorvância causando baixa reprodutibilidade, e a interação do β-caroteno com o oxigênio proveniente do meio dificulta a interpretação dos resultados.33, Análise por fluorescência - ensaio fluorimétrico, Pesquisas clínicas, farmacêuticas e bioquímicas estão sendo continuamente estimuladas na procura por métodos analíticos mais sensíveis usando microamostras.
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